Tá beagnach gach cuideachta a dhíol anpúdar einsím bromelainmeasctha le papain.Tá sé deacair an bromelain a íonú go 5000GDU/g. ach tá sé an-éasca an papain a íonú go 1000,000GDU/g. fiú go 2000,000GDU/g. ach tá feidhmeanna bromelain difriúil ó na papain. tá codarsnacht idir dath, ord, tuaslagthacht uisce, agus blas leis an táirge falsa agus an táirge fíor. Is difríocht iad go bhfuil an púdar ceart einsím bromelain liath, gan bholadh, gan blas agus dothuaslagtha in uisce.
Ach tá na gnéithe seo a leanas ag an bromelain bréagach:
● Tá sé solas-buí, aramatacha agus éadrom milis, agus intuaslagtha in uisce. Is tréith papain é.
● Úsáidtear é chun athlasadh a laghdú agus chun pian a mhaolú. ach níl na feidhmeanna seo sa phápa beagnach ar bith.
● Úsáidtear é mar fhorlíonadh aiste bia amháin, ní breiseán bia, ach go deimhin is féidir é a bheith grád cógaisíochta. Ach ní úsáidtear papain ach mar phúdar tairisceana feola agus cosmaidí.
Thástáil muid an bromelain de réir fhoirmiú SDS-PAGE agus modhanna ANAILÍSIGH AONAD DÍOLTA geilitín agus HPLC, tá níos lú móilíní sprice i modh glóthach SDS-PAGE le haghaidh táirge falsa.
Seo a leanas na torthaí leictreafóiréis SDS Page
Léiríonn an speckle thuas nach bhfuil ach an speckle céanna ag an táirge ceart ar an áit cheart sa phictiúr, ach níl mórán speckles ar an táirge falsa, rud a chiallaíonn gur ar éigean atá an meáchan móilíneach le feiceáil.
Tá meáchan móilíneach Bromelain thart ar 33000, ach is é 21000 an meáchan móilíneach papain. Agus an Crómatagram HPLC:
Feicfidh tú nach bhfuil ach na meáchain cheart móilíneacha bromelain sa sliocht ceart agus tá sé inbhraite ag HPLC.
Ach mura ndearnamar ach tástáil trí Mhodh Anailíseach an Aonaid um Dhíleá Geilitín (GDU) féach Iarscríbhinn II. Tá na torthaí céanna ag an táirge ceart agus bréagach araon agus atá thíos:
Tá gas anann an-saor, agus tá an ráta ó gas go bromelain an-íseal, tá roinnt truaillithe sa phróiseas déantúsaíochta.
Tá beagnach gach monarcha púdar einsím bromelain in aice le réimse. Úsáideann siad gas úr. Tá sé dodhéanta an gas a sheoladh i bhfad. Ba cheart an t-amhábhar a láimhseáil chomh luath agus is féidir nuair a bhailítear é ón réimse nó ba cheart é a stóráil i dtimpeallacht íseal-teocht (4-8 céim ) chun díghrádú próitéin a sheachaint. Sa saol fíor, ní féidir leis an monaróir aon cheann den dá choinníoll thuas a chomhlíonadh mar gheall ar an iomarca pineapples gais. Is é an modh réasúnta cothromaíocht idir am láimhseála agus caillteanas gníomhaíochta próitéine. De ghnáth, déantúsaíocht na n-amhábhar amh sa séasúr fómhar anann, agus na hamhábhair a stóráil i dtimpeallacht íseal teochta (4-8 céim).
Táimid ag déanamh roinnt tástála faoin leictreafóiréis Leathanach SDS, Go teoiriciúil is féidir linn é a ardú go 10,000 nó 20,000.ach beidh sé an-chostasach. 5000GDU/g agus é a dhéanamh cobhsaí b'fhéidir ar thacaíocht malto / ceann nó rud éigin microencapsulated móide eastóscadh / íonú grád orgánach.
Iarscríbhinn I
● Modh 5 leictreafóiréis glóthach polyacrylamide SDS (SDS-PAGE)
Is modh leictreafóiréis glóthach polyacrylamide dínádúraithe é SDS-PAGE. Tá prionsabal na scaradh próitéine sa mhodh seo bunaithe ar an bhfíric gur féidir an chuid is mó de phróitéiní a chomhcheangal leis an surfactant anionic sóidiam dodecyl sulfate (SDS) i gcóimheas meáchain chun coimpléasc a fhoirmiú.
Tá an muirear diúltach a iompraíonn móilíní próitéine i bhfad níos mó ná glanmhuirear na móilíní próitéine nádúrtha, rud a fhágann éifeacht muirir na móilíní próitéine éagsúla a dhíchur agus próitéiní a scaradh de réir a méid móilíneach.
Úsáidtear an modh seo chun sainaithint cáilíochtúil, rialú íonachta agus eisíontais, agus chun próitéiní a chinneadh go cainníochtúil.
1 gléas ionstraime
Voltas tairiseach nó soláthar cumhachta reatha tairiseach, umar leictreafóiréis pláta ingearach, agus múnla déanta greamachán.
2. Imoibrithe
(1) Uisce.
(2) Maolán glóthach deighilte (4x, tuaslagán A) 1.5mol/L trí-hiodrocsaimeitil aimínaigéad maolán aigéad hidreaclórach. Meáigh 18.15g de aimínaimeatán trihydroxymethyl agus thuaslagadh le méid cuí uisce é. Coigeartaigh an luach pH go 88 le haigéad hidreaclórach agus caolaigh go 100ml le huisce.
(3) Meáigh 58.0g aicriolaimíde agus 20g de N, N '- déshaicrilimíd meitiléine i dtuaslagán aicriolaimíde 30 faoin gcéad (tuaslagán B), tuaslagtha in uisce te agus caolaigh go 200ml, scag le páipéar scagtha (stóráilte i dorcha).
(4) Meáigh 10g de shulfáit dodeicile sóidiam i dtuaslagán SDS 10 faoin gcéad (tuaslagán C), tuaslagtha in uisce, agus caolaigh go 100ml
(5) Imoibrí tráchtálaithe de thuaslagán tetramethylethylenediamine (TEMED, tuaslagán D).
Tuaslagán sársulfáit amóiniam 10 faoin gcéad (tuaslagán E) Meáigh 10g de shársulfate amóiniam, tuaslagtha in uisce, agus caolaigh go 100ml é. Moltar é a ullmhú roimh úsáid nó é a stóráil ar leithligh ag -20 céim ar feadh 2 sheachtain.
(7) Maolán tiubhaithe rubair (4 ×, tuaslagán F) 0.5mol/L Trihydroxymethylaminomethane maolán aigéad hidreaclórach, meáigh 6.05g de Trihydroxymethylaminomethane, cuir méid iomchuí uisce le tuaslagadh, coigeartaigh an luach pH go 6.8 le hidreaclórach aigéad, agus caolaigh sé le huisce go 100ml.
(8) Maolán leictreoid (10 ×) Meáigh 30g de trimethylaminomethane, 144g de glicín, agus 10g de shulfáit dodeicile sóidiam, déan iad a dhíscaoileadh in uisce agus caolaigh go dtí thart ar 800ml. Coigeartaigh an luach pH go 8.1-8.8 le haigéad hidreaclórach, agus caolaigh go 1000ml le huisce.
(9) Maolán sampla neamh-laghdaithe (4 ×) Meáigh 30 3g de trimethylaminomethane, 20mg de bromophenol gorm, agus 8.0g de shulfáit dodeicile sóidiam, tomhas 40ml de ghliocról, tuaslagtha in uisce agus caolaigh go dtí thart ar 80ml. Coigeartaigh an pH go 68 le haigéad hidreaclórach, agus caolaigh go 100ml le huisce.
(8) Maolán leictreoid (10 ×) Meáigh 30g de trimethylaminomethane, 144g de glicín, agus 10g de shulfáit dodeicile sóidiam, tuaslagtha in uisce agus caolaigh go dtí thart ar 800ml. Coigeartaigh an luach DH go 81-88 le haigéad hidreaclórach, agus caolaigh go 1000ml le huisce
(9) Maolán sampla neamh-laghdaithe (4 ×) Meáigh 3.03g de trimethylaminomethane, 20mg de bromophenol gorm, agus 80g de shulfáit dodecyl sóidiam, tomhas 40ml de ghliocról, tuaslagtha in uisce, agus caolaigh go dtí thart ar 80ml. Coigeartaigh an pH go 6.8 le haigéad hidreaclórach, agus caolaigh go 100ml le huisce.
(10) Maolán substaintí tástála laghdaithe (4 ×) Meáigh 3.03g de trimethylaminomethane, 20mg de bromophenol gorm, agus 80g de sulfáit dodecyl sóidiam, tomhas 40ml de ghliocról, tuaslagtha agus caolaigh le huisce go dtí thart ar 80ml, agus cuir leis. - 20ml mercaptoethanol, coigeartaigh pH go 6.8 le haigéad hidreaclórach, caolaigh le huisce go 100ml (nó 3.03g de trimethylaminomethane, 20mg de bromophenol gorm, 8.0g de shulfáit dodeicile sóidiam, tomhas 40ml de ghliocról, tuaslagtha in uisce agus caolaigh go 80ml, coigeartaigh an pH go 6.8 le haigéad hidreaclórach, caolaigh sé le huisce go 100ml, agus roimh úsáid, cuir dithiothreitol go 100mmol/L).
● Iarscríbhinn II
Aonad Díleá geilitín Modh Anailíseach (GDU)
A. Cuspóir: Úsáidtear an nós imeachta seo chun gníomhaíocht próitéalaíoch Púdar Einsím Bromelain a chinneadh.
B. Trealamh:
1. Méadar pH
2. Folcadán Uisce Teochta Seasmhach ag 45.0 céim ± 0.1 céim
3. Iarmhéid Anailíseach
4. Fleascáin toirtmhéadracha
5. Pípéid toirtmhéadracha
6. Uaineadóir
7. Buiréad Digiteach (Cruinneas 0.1 ml)
8. Cochall múiche
9. Píobairí Uathoibríoch
C. Réamhchúraimí Sábháilteachta:
Ní mór an tástáil seo a dhéanamh sa chochall múch.
1. Cleachtais chaighdeánacha sábháilteachta saotharlainne a úsáid.
2. Formaildéad: Ullmhaigh agus coinnigh i gcochall múiche i gcónaí. Carcanaigin agus teratogen aitheanta.
3. Sárocsaíd: Ocsaídeoir láidir
D. Imoibrithe agus ullmhóidí imoibrí:
1. Uisce driogtha: thart ar 500 ml: coigeartaigh go pH 4.5 le 0.1 N HCI.
2. Foshraith geilitín:
a. Tuaslaig 25 gram de geilitín (Mikrobiologie. 1.04070) i 375 ml uisce te, a thabhairt chun boil. Cool go dtí 45 céim.
b. Coigeartaigh an pH go 4.5 le 0.1 N HCI agus caolaigh go 500 ml pH 4.5 uisce driogtha.
c. Coinnigh an tsubstráit geilitín ag 45 céim.
3. Réiteach Maolán:
a. Cuir 15 gm NaCl isteach go mall le 40-50 ml uisce in eascra 150ml agus corraigh chun é a thuaslagadh.
b. Cuir 0.570 ml d'aigéad aicéiteach leis.
c. Coigeartaigh an pH go 4.5 le 0.2N HCL (beidh an méid níos mó ná 100ml.)
4. Sárocsaíd hidrigine 3 faoin gcéad:
a. Pípéad 2.5 ml sárocsaíd hidrigine 30 faoin gcéad (stoc thuaslagán) isteach i bhfleascán toirtmhéadrach 25 ml agus caolaigh go toirt le pH 4.5 uisce driogtha
5. 37 faoin gcéad Formaildéad pH 9.0: a. Coigeartaigh toirt leordhóthanach (100 ml) formaildéad go pH 9.0 le 0.1 N NaOH (thart ar 20 ml formaildéad in aghaidh an tsampla roimh choigeartú pH.)
Modh Anailíseach Aonad Díleá Geilitín (GDU) - ar lean.
6. 0.100 N NaOH: (Caighdeánaithe ceannaithe) a. Stoc réiteach: caighdeánaithe ag 0.100 N
E. Nós Imeachta:
1. Ullmhú Einsím:
a. Ullmhúchán Einsíme a Ríomh
Meáchan {{0}}/Gníomhaíocht sprice (thart ar 0.05 g nó 50 mg)
A. Meáigh an einsím go beacht isteach i bhfleascán toirtmhéadrach 50 ml
B. Cuir 8.3 ml de thuaslagán maolánach leis.
b. Lig seasamh ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra.
C. Caolaigh go 50 ml ag baint úsáide as uisce driogtha pH 4.5, cuir barra beag corraigh leis agus corraigh ar feadh 10 go 15 nóiméad breise
2. Nós Imeachta einsím:
a. Pípéad 25 ml d'fhoshraith geilitín isteach i ngach ceann de dhá eascra 100 ml ina bhfuil barraí corraigh agus cuir i ndabhach uisce iad ag 45 céim ar feadh 5 nóiméad, ceann amháin don Réiteach Tástála agus an ceann eile don Réiteach Bán.
b. Réiteach Tástála:
1) Cuir 1.0 ml de thuaslagán púdar einsím bromelain isteach san eascra atá sainithe don tuaslagán tástála, am tosaithe agus suaitheadh.
2) Tar éis 20 nóiméad goir go díreach ag 45 céim , cuir 0.1 ml de shárocsaíd hidrigine 3 faoin gcéad agus cuir an guairneán.
3) Gor ar feadh 5 nóiméad breise.
4) Bain an t-eascra as an dabhach uisce agus cuir isteach an taiscéalaí pH de réir a chéile.
5) Taifead an pH tar éis 10 soicind (pH tosaigh)
6) Coigeartaigh go pH 6.0 le 0.1 N NaOH. (Tuairim is 2-4 ml)
*Nóta: Agus an pH á choigeartú go 6.0 bí cúramach ag pH 5.8; méadaíonn an pH go mall agus méadóidh breisiú nóiméad NaOH ag an bpointe seo an pH go suntasach.
7) Ag leanúint ar aghaidh ag corrú tairiseach, cuir 10 ml de 37 faoin gcéad formaildéad pH 9.0 leis.
8) Taifead an pH tar éis 10 soicind agus 1 nóiméad.
9) Toirtmheascadh go pH 9.0 le 0.1 N NaOH.
10) Taifead toirt an toirtmheasctha.
Is é seo an titer tástála, T. c.
Réiteach Bán: Ba cheart an Réiteach Bán a rith i gcomhthráth leis an réiteach Tástála. Baintear é seo amach trí chinneadh an Réitigh Bhán a thosú 12 nóiméad tar éis an Réiteach Tástála a thosú. Tugann sé sin am duit an mheasúnacht ar an Réiteach Tástála a chríochnú sula mbeidh ort dul ar aghaidh leis an Réiteach Bán. 1) Cuir 0.1 ml de shárocsaíd hidrigine 3 faoin gcéad leis an eascra atá ainmnithe don tuaslagán bán agus cuir an guairneán.
2) Tar éis 20 nóiméad goir go díreach ag 45 céim cuir 1.0 ml de thuaslagán bromelain agus guairneáin.
3) Gor ar feadh 5 nóiméad breise.
MODH ANAILÍSIGH AONAD DÍOLTA geilitín (GDU) - ar lean.
4) Bain an t-eascra as an dabhach uisce agus cuir isteach an taiscéalaí pH de réir a chéile.
5) Taifead an pH tar éis 10 soicind (pH tosaigh)
6) Coigeartaigh go pH 6.0 le 0.1 N NaOH. (Thart ar 2-4 ml)*Féach an Nóta thuas.
7) Ag leanúint ar aghaidh ag corrú tairiseach, cuir 10 ml de 37 faoin gcéad formaildéad pH 9.0 leis.
8) Taifead an pH tar éis 10 soicind agus 1 nóiméad.
9) Toirtmheascadh go pH 9.0 le 0.1 N NaOH.
10) Taifead toirt an toirtmheasctha. Is é seo an titer bán, B.
F. Ríomh:
1. Sainmhíniú: Is é Aonad Díleá Geilitín amháin an méid sin einsím a shaorfaidh, tar éis 20 nóiméad díleá ag 45 céim, 1 mg aimínaigéad ó thuaslagán geilitín caighdeánach ag pH 4.5 nó pH 5.5 (GDU pH 4.5 nó pH 5.5).
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) Cá háit: T=Teideal tástála (ml -.1 N NaOH) B=Titer bán (ml 0.1 N NaOH) N=Normalacht NaOH caighdeánaithe (.i. 0.100) Wt(g)=Meáchan tosaigh na heinsíme
G. Paraiméadair Tástála:
1. Caolaítear ullmhóidí einsímí go tiúchan de thuairim is 0.001 g/ml (1 mg/ml) nó le haghaidh púdar einsím bromelain thart ar 1-2 GDU/ml. Déantar Ábhar Tagartha a mheas le gach rith chun cruinneas an mhodha a chinntiú.
Soláthraíonn Guanjie púdar bromelain mórchóir, ag baint úsáide as an modh tástála GDU. Feidhmíonn ár bpróiseas táirgthe faoi cheardlanna caighdeánacha CGMP, ag baint úsáide as trí línte táirgeachta thar dhá mhonarcha, agus dhá shaotharlann neamhspleácha. Le haghaidh aon fhiosrúcháin maidir lenár dtáirgí, déan teagmháil linn aginfo@gybiotech.com.
